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| 粪产碱杆菌青霉素G酰化酶（AfPGA） |
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技术简介：
本技术涉及表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的大肠杆菌工程菌，AfPGA分泌到周质空间。
青霉素G酰化酶（PGA）能催化β内酰胺类抗生素发生脱酰基作用生产6-氨基青霉烷酸（6-APA）, 还能催化头孢霉素G(重排酸)脱苯乙酸生成7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸（7-ADCA）, 6-APA和7-ADCA是半合成β内酰胺类抗生素的关键中间体，PGA还能高效催化半合成头孢霉素的合成。青霉素G酰化酶(PGA)是半合成抗生素生产中最重要最关键的酶。PGA 已经成功应用于酶法合成Ampicillin, Amoxicillin, Cephalexin以及其它半合成抗生素生产。酶法生产工业的简便性、显著提高的生产率及有毒试剂的略去,使其在生产和经济上竞争力大增。
粪产碱杆菌青霉素G酰化酶（AfPGA）的酶学性质有如下优点:1. AfPGA 对底物具有更高亲和力,对青霉素G的Km值比大肠杆菌青霉素G酰化酶（EcPGA）和巨大芽孢杆菌（BmPGA）低一个数量级。而其kcat值是所有PGA中最高的,表现出高活性;2.AfPGA 是PGA 家族中唯一在一级结构中具有链内二硫键的成员,酶的热稳定性和pH 稳定性均很高;3. 在手性分子识别能力上,AfPGA比EcPGA 有更高选择性;4. AfPGA 在有机溶剂中表现出很高稳定性,在双水相催化抗生素母核氨基和苯乙酰胺缩合时,催化效率比EcPGA 高一个数量级。总之,AfPGA 将在半合成抗生素工业中有很好的应用前景。
技术特点：
1. 该工程菌产酶不需诱导。
2. 优化了5L 发酵罐中工程菌的发酵条件后, 发酵60小时质粒稳定性为86 % ,青霉素G酰化酶的表达水平达50 000U/L（NIPAB法），比酶活达到(800U/L)/OD600。
3. 产酶高峰发酵时间100小时
4. 酶比活达11.249U/mg，可直接进行酶的固定化。
专利状态：
技术相关专利均已授权：ZL200310108792.6 sibs03-030
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| 发表时间：2008-12-18 |
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